了解动物疫病血凝分析仪的原理

动物疫病血凝分析仪型号：DY-7000

DY-7000动物疫病血凝分析仪广泛于动物疫病预防控制中心、动物防疫监督所、兽医药品监察所、兽医研究所、大学、疫苗生产和大中型饲养企业等单位。 
DY-7000动物疫病血凝分析仪是国内*根据国标中重大疫病免疫监测方法研制的设备，配套使用自动血凝分析管理软件，能自动监测常见重大动物疫病的免疫抗体效价，及时掌握动物疫病流行规律和疫情动态，建立动物免疫效果监测记录档案。系统当前监测项目有：猪瘟抗体正向间接血凝检测、口蹄疫抗体正向间接血凝检测、高致病性禽流感H5亚型抗体血凝抑制检测、高致病性禽流感H7亚型抗体血凝抑制检测、高致病性禽流感H9亚型抗体血凝抑制检测、新城疫抗体血凝抑制检测。 

试验方法： 
1 血凝（HA）试验 
1） 在V型微量反应板的1～12孔均孔加入0.025ml PBS，换滴头。 
2） 吸取0.025ml血凝抗原加入*孔，混匀。 
3） 从第1孔吸取0.025ml血凝抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025ml弃去，换滴头。 
4） 每孔再加0.025ml PBS。 
5） 每孔均加入0.025ml 1%（V/V）鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。 
6） 将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温（20～25℃）下静置40分钟后观察结果，（如果环境温度太高，可置4℃环境下），在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。 
7） 结果判定  将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌。*血凝（不流淌）的抗原或病毒zui高稀释倍数代表一个血凝单位（HAU）。 
2  血凝抑制（HI）试验 
1） 根据HA试验测定的效价，计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。以*血凝的病毒zui高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如，HA效价为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。 
2） 加稀释液： 
在微量反应板的第1～11孔加入0.025ml PBS，第12孔加入0.05ml PBS。 
3） 稀释待检血清： 
取1号待检血清0.025ml加入*排第1孔，充分混匀后吸0.025ml于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025ml弃去。 
取2号待检血清加入第2排；取3号待检血清加入第3排……均按上法稀释。 
  注意！每取一份血清时，必须更换吸头。 
4） 稀释阴性血清： 
  在血凝板的第7排*孔加阴性血清0.025ml，对倍稀释至第3孔，混匀后从该孔取出0.025ml弃去。 
    5） 稀释阳性血清： 
  在血凝板的第8排第1孔加阳性血清0.025ml，对倍稀释至第10孔，混匀后从该孔取出0.025ml弃去。 
6） 第1～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025ml，在室温（20～25℃）下静置30分钟或2～8℃ 50分钟。 
7） 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温（20～25℃）下静置20～30分钟或2～8℃ 45～60分钟，对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。 
结果判定  
以*抑制4 HAU抗原的zui高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。 
只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照血清误差不过1个滴度，试验结果才有效。 
禽流感灭活疫苗的免疫效果判定：家禽免疫后21天进行免疫效果监测。禽流感抗体血凝抑制（HI）抗体效价≥24判定为合格 
存栏家禽抗体合格率达到≥70%判定为合格。 
新城疫免疫效果监测：免疫21天后，进行免疫效果监测。抗体血凝抑制试验抗体效价≥25判定为合格 
存栏家禽抗体合格率达到≥70%判定为合格。 

【注意事项】  
（1）HA和HI试验影响因素甚多，应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。 
（2）准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。 
（3）用pH值7.0～7.2的PBS作为稀释液。 
（4）抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。 
（5）准确配制4HAU抗原，使用前需进行滴定，滴定好的抗原应在2小时内用完。 
（6）抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2～8℃保存不过1个月；可分装成小包装，-70℃冻存，随用随取。切忌反复冻融。 
（7）鸭、鹅以及哺乳动物的血清一般需进行非特异性凝集和抑制素的处理。 
（8）同一亚型不同毒株的HI试验抗原，若抗原性存在差异，则检测同一血清的HI效价不同。 
（9）在使用微量加样器时，枪头进入试剂瓶面下约2~3ml深处，不可过深。待枪头撤出液面后斜贴在试剂瓶的瓶壁上，淌走多余的液体，防止形成液滴滴入凝集板孔中。 
（10）鸡红细胞悬液是现配现用，剩余的放于4℃保存，如果出现溶血现象则不能使用。 
（11）每次检测可只做一份阴阳性血清对照试验。 
（12）试验完成后立即上机判读，否则易出现红细胞下滑现象。 
（13）冻干对照血清和抗原存放于-20℃，溶解过后存放于4℃。